LICZENIE KOMÓREK W KOMORZE BÜRKERA

Założenia:

Określenie ilości komórek w danej objętości medium lub płynów fizjologicznych jest niezbędne w późniejszych eksperymentach.

Opis procedury:

1. Oddzielić komórki od dna naczyń hodowlanych przy pomocy trypsyny z EDTA, tzn. „strypsynować komórki”.
2. Dodać do zawiesiny komórek medium z surowicą, bardzo dokładnie wymieszać komórki.
3. Sterylną pipetą pasteurowską lub pipetą automatyczną (sterylnym żółtym tipsem) nałożyć zawiesinę komórek do komory Bürkera (tzn. wpuścić komórki pod szkiełko nakrywowe).
4. Liczyć komórki w komorze w następujący sposób:

- liczyć komórki w 9 dużych kwadratach (ograniczonych potrójną linią, składających się z 16 małych kwadratów każdy ograniczonych podwójną linią),

- z otrzymanych 9 zliczeń wyciągnąć średnią,

- w przypadku, gdy komórki są nierównomiernie rozłożone w dużych kwadratach i pozlepiane między sobą, należy komórki porządnie wymieszać i liczyć je jeszcze raz,

- zaczynać liczenie od lewego, górnego kwadratu

 Objętość komory Bürkera wynosi 0,0001 cm³ (0,0001 ml)

Ilość komórek w 1 ml wynosi więc: 10.000 x średnia ilość komórek

Ilość komórek w badanej objętości: ilość ml zawiesiny komórek x 10.000 x średnia ilość komórek.

- komory Bürkera należy po każdym użyciu dokładnie wymyć wodą z detergentem, dobrze wypłukać wodą bieżącą, 2-3 krotnie wodą destylowaną i dobrze wytrzeć szmatką lub „kim-wipesem”, szkiełka nakrywowe należy dobrze wymyć wodą z detergentem, dobrze wypłukać wodą bieżącą, 2-3 krotnie wodą destylowaną, następnie wypłukać w 70% alkoholu etylowym i dobrze wytrzeć szmatką lub „kim-wipesem”. Szkiełka nakrywowe nakłada się na mokro na komorę Bürkera. Należy zwrócić uwagę by w miejscu łączenia szkiełek na mokro pojawiły się pierścienie Newtona.