PRZEPROWADZENIE TESTU KLONOGENNOŚCI (ANG. CLONOGENIC ASSAY)

Założenia:

Test ten jest przeprowadzany w celu:

-        określenia liczby komórek tworzących kolonie w tzw. mediach selekcyjnych (mediach z dodatkiem czynnika selekcjonującego) i porównania tej liczby z liczbą kolonii utworzonych przez komórki rosnące w medium wzrostowym (medium bez dodatku czynnika selekcjonującego),

-        porównania między sobą liczby komórek tworzących kolonie w różnych mediach, w przypadku różnych linii komórkowych.

Opis procedury:

1. Komórki „strypsynować”, policzyć:
2. Określoną ilość komórek umieścić w odpowiedniej objętości medium z surowicą (+FBS) na wybranych płytkach:

- w przypadku gdy test przeprowadza się w płytkach 6-dołkowych na 1 dołek wysiewa się 1.000 komórek danej linii komórkowej w 3 ml medium z surowicą,

- w przypadku gdy test przeprowadza się w płytkach  o średnicy 6 cm na 1 płytkę wysiewa się 500 komórek danej linii komórkowej w 4 ml medium z surowicą.

Uwaga!

Im większa średnica płytki, tym większa wydajność posiewu.

3. Następnego dnia zmienić medium na określony rodzaju medium z surowicą: medium wzrostowe lub medium selekcyjne (medium zawierające określony antybiotyk selekcyjny); zarówno na płytki 6 cm jak i na 1 dołek płytki
6-dołkowej dodać 5 ml określonego medium z surowicą.

4. Zmieniać medium w zależności od ilości wybijanych komórek (dokładnie notować dni zmiany medium).